空气中细菌的检验(二)
  时间:2019-01-08 09:38:36 来源: 万达娱乐官网 作者:匿名


(1)检查饮用水

1.初始发酵试验

在两个含有灭菌的50mL浓缩乳蛋白肉汤培养基(内置反应管)的大型发酵罐中,无菌加入100mL完全混合的水样;在5mL浓缩乳糖蛋白胨培养基发酵管(内部具有反应管)中,无菌加入10mL充分混合的水样品,混合,并置于37℃培养箱中24小时。

2,板分离

在初始发酵试验后,在产酸产气和产酸发酵管中,用无菌接种环吸出溶液并接种在透明质酸钠培养基或曙红蓝培养基上,温度设定为37℃。将细胞培养18至24小时,选择具有下列特征的菌落,涂片,革兰氏染色和显微镜检查。

透明质酸钠培养基上的菌落:紫红色,具有金属光泽;深红色,没有或有金属光泽;浅红色,中心较暗。

曙红蓝色培养基上的菌落:深紫色黑色,具有金属光泽;紫黑色,无金属光泽或略带金属光泽;淡紫色,中心颜色较深。

3.双重发酵试验

通过无菌接种环拾取革兰氏阴性无芽孢杆菌菌落的上述部分并接种到含有10mL普通乳蛋白胨培养基(内部有反应管)的发酵管中,接种每个管并且从中分离发酵管的最典型的菌落是1-3,并且它们在37℃培养箱中培养24小时。如果存在产酸气体,则证实存在大肠菌群。

4,计算

根据确认存在于大肠菌群中的阳性管数报告水样中的大肠菌群数,见表10-3。

(2)源水检查

1将水样稀释10次。

2向含有5mL浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个发酵管(含有反应管)中的每一个中加入10mL水;加入5 mL含10 mL乳蛋白肉汤的发酵管(含反应管)1 mL水样;在含有10mL乳铁蛋白培养基的5个发酵管(含有反应管)的每一个中稀释10倍的1mL水样品;共15管,3个稀释液。将管充分混合并置于37℃培养箱中24小时。

以下检查程序与“饮用水试验方法”相同。根据表10-4,报告了大肠菌群中存在的阳性管的数量,并报告了水样中的大肠菌群数。

(3)地表水和废水的检查

地表水和清洁水的初始发酵测试程序与“源水”测试相同。对于污染严重的地表水和废水初始发酵试验的接种水样,应用1:10,1:100,1:1000或更高的稀释比,试验程序与“源水”相同测试方法。

如果接种的水量不是10mL,1mL和O.1mL,但是3或更低浓度的水样,也可以在表中查找MPN指数,然后转换为每100mL MPN值100mL,即:

四是土壤中细菌的检测

土壤营养丰富,各种生态和环境条件适合微生物的生长发育。因此,土壤中存在大量细菌,这是人类利用细菌资源的主要来源。土壤中还存在许多致病菌,主要来自人畜排泄物和未经处理的河水,用于农田灌溉和土壤,土壤往往是水污染的主要来源。

(1)土壤中细菌的分离

当土壤中的细菌分离时,根据不同的目的和物体分离的自然环境以及隔离物体的特性选择相应的介质和分离方法。

1.好氧细菌的分离

将制备均匀的土壤悬浮液用于一系列稀释。将一定量的悬浮液从适当的稀释样品接种到平板培养基上并均匀分布以从生长的菌落中分离所需的细菌。

(1)土壤悬浮液的制备取10g新鲜土壤样品,置于无菌研钵中,加入少量无菌水并研磨1-2分钟直至土壤没有大颗粒。倒入已灭菌的250 mL烧瓶中。用无菌水将未悬浮的悬浮液用无菌水洗涤到收集瓶中。连续洗几次,直到洗完。最后,制备1:10土壤稀释液,在振荡器上以每分钟约70次振荡10分钟,然后以一定比例稀释至所需稀释度。

(2)电镀

1涂抹法。将已熔化并冷却至45至50℃的培养基注入直径为90mm的无菌培养皿中,并以每种约18至20mL的量注入培养皿。培养基固化后,将其置于灭菌的60℃中。在~70℃的烘箱中,倒置培养皿,稍微露出盖子,干燥15-20分钟以除去培养基表面上的冷凝水。 。使用1 mL无菌移液管,将0.05 mL(1滴)土壤稀释液加入板中心,用无菌玻璃刮刀均匀涂抹接种物。将相同的土壤样品分成3个稀释液,每个稀释液重复3次。2混合菌法。移取1mL稀释的溶液并将其加入无菌培养皿中。在3次连续稀释中取出相同的样品,每次稀释重复3次。将样品加入培养皿后,分别注入约18至20mL已熔化并冷却至45至50℃的培养基。摇动培养皿,将样品和培养基充分混合。固化后,将培养皿倒置并置于30至32℃的培养箱中2至3天;记录菌落的特征和数量以确定优势菌群。

从固体平板中分离的菌株虽然从单个菌落中挑选,但不一定由单个细胞的后代形成。因此,它们不能被认为是纯培养物,并且必须将该原始培养物用作进一步分离和纯化的材料。

分离获得的原始培养物,用无菌水制备较低浓度的细菌悬浮液,并通过涂片法或混合法分离板。重复2至3次后,当平板上没有异常菌落时,可以确认为纯培养物。除了上述方法之外,可以采用平板划线方法来分离细菌菌株。

参考材料:环境中的有毒有害物质和分析测试

相关链接:

检查空气中的细菌(1)

[关键词]细菌,真菌,空气,检验,国家标准物质网络

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